质粒提取装置是分子生物学实验中获取高纯度质粒DNA的核心工具，操作质量直接影响后续转染、测序、克隆等实验的成功率。若使用不当，易因菌液处理错误、缓冲液配比失准、过柱操作失误或交叉污染，导致得率低、纯度差、内毒素残留或样本混淆。
质粒提取装置应严格遵循菌活、液准、流匀、防污的使用原则，确保提得快、纯得高、用得稳。
一、使用前准备
菌液培养规范：
使用LB或TB培养基，37℃振荡培养至对数生长期，避免过度培养导致质粒降解；
试剂与耗材检查：
确认SolutionI/II/III、PW洗涤液、洗脱液（如TE或无核酸酶水）齐全且未过期；
离心柱或96孔板无破损，真空管路密封良好；
设备预检：
自动化装置开机自检，确认移液臂、真空泵、废液桶状态正常。
二、规范操作流程
菌体收集与重悬：
离心（≥6,000×g，5min）弃上清，用SolutionI充分重悬菌体，无可见团块；
精准裂解与中和：
加入SolutionII后轻柔颠倒4–6次，溶液应呈清亮粘稠状；
2–5分钟内加入SolutionIII，立即混匀至出现白色絮状沉淀；
上柱与过柱控制：
裂解液离心取上清（或直接上样），分次加入离心柱，避免超载；
真空模式下控制流速，防止干柱（硅胶膜干裂将大幅降低吸附效率）。
三、洗涤与洗脱要点
充分洗涤：
加入PW缓冲液（含乙醇）后静置1分钟再抽滤，重复2次，去除盐分与蛋白；
空抽2–3分钟，去除乙醇残留（否则抑制下游酶反应）；
高效洗脱：
用预热至65℃的洗脱液（30–50μL）滴加于膜中央，静置1–2分钟后离心回收，提升得率30%以上。
五、停机与维护
自动化设备运行结束后，执行“管路清洗程序”，防止缓冲液结晶堵塞；
真空泵定期更换油液，废液桶及时清空并消毒；
离心模块转子每月检查是否松动或腐蚀。
13401021128
当前位置：